OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE RNA EM DIFERENTES TECIDOS DE MILHO

BRENDA NEVES PORTO, PAULO CÉSAR MAGALHÃES, NÁDIA ALVES CAMPOS, JOSÉ DONIZETI ALVES, MARCELO MURAD MAGALHÃES

Resumo


Neste trabalho, foram testados cinco métodos de extração de RNA (CTAB microextração (Chang et al., 1993), Concert™ Invitrogen, Concert™ Adaptado, TRI Reagente® Sigma e TRI Reagente® Adaptado), em dois diferentes tecidos de milho (mesocótilo e raiz), com o objetivo de estabelecer um método eficiente de extração de RNA, visando posteriormente estudos de expressão gênica. Observou-se que o método Concert ,utilizando o protocolo adaptado, foi o mais eficiente para a extração de RNA de ambos os tecidos de plântulas de milho, originando 2351,35 µg por 100 mg de tecido para mesocótilo e 893,75 µg por 100 mg de tecido para raiz, considerando tanto a quantidade como a qualidade das amostras, podendo ser submetidas às etapas posteriores de tratamento com DNAse e construção de cDNA para estudos de expressão gênica. Pôde-se observar que pequenas modificações nos protocolos, como, por exemplo, mudança no tempo e na posição dos tubos durante a incubação e o incremento de duas lavagens com clorofórmio, podem melhorar muito tanto a qualidade quanto a quantidade do RNA extraído.


Palavras-chave


Ácidos nucléicos, Zea mays, mesocótilo, raiz

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DOI: https://doi.org/10.18512/1980-6477/rbms.v9n2p189-200